Petri kabında mantar miseli üretmek

[verdoque]

Merhaba,

Ben de bir süredir evde kendi çapımda mantarlarla uğraşıyorum. Mart başında doğadan toplanmış 3 adet Pleurotus Eryngii mantarı ile ilk agar denemelerimi yapmaya başladım. İlk denemem tabii ki başarısız oldu Hatta ekte örnek olması açısından resimlerini ekliyorum.

Agar hazırlamak, petri kabı almak vs daha önce hiç yapmadığım için gözümde büyümüştü. İnternette bayağı bir aradım, taradım en son Oksilab'dan 20li hazırlanmış PDA petri kabından sipariş verdim. Birkaç gün tedarik etmeleri gerektiğini söyleyerek beklettiler. Sonunda içinde 10'lu 2 jelatin paket olan bir kutu geldi. Jelatinin birinde tek bir petri kabında kontaminasyon vardı ama artık mantarlar bozulmasın diye geri gönderemedim, kullanmak durumunda kaldım. Kontamine olanı attım, diğer kaplarda gözle görünür bir kirlenme yoktu.

7 Mart tarihinde izopropil alkolle masa ve aletlerimi temizledim, bir de mum yaktım. Cımbız ve bıçağı ateşe tutup alkolde söndürdüm. Elimle ikiye böldüğüm mantarın orta kısmından küçük parçalar alıp petrilere koydum. 6 petri kabına 5er parça aktardım. Kenarlarını bantlayıp alkolle temizlediğim bir kabın içinde buzdolabına koydum. Birkaç gün bekledim baktım hiç gelişme yok, bir tanesini denemelik dışarı çıkarıp karanlık bir yere kaldırdım. 2-3 gün sonra miseller gelişmeye başlayınca diğerlerini de çıkardım. Ekte koyduğum resimdeki büyük yuvarlak kısımdaki miseller ilk günlerde çok temizdi sonra renk dalgalanmaları ve kirlenme görünür hale geldi. O ilk yayılma anında hemen yeni petri kabına parça aktarmam gerekiyormuş, onu kaçırdığım başarısız oldum. (Ekteki fotoğrafların tarihi 16 Mart.)

Sonra sterilizasyonla ilgili başka ne yapabilirim diye araştırdım. www.shroomery.org'da aşağıdaki bağlantıyı gördüm:

https://www.shroomery.org/8513/Agar-...-isolation-TEK

Hidrojen peroksitin bakteriyel kontaminasyonu engelleyici şekilde kullanılabileceği, bakteri ve sporlara etkili olduğu misele zarar vermediği ile ilgili bilgiler de okuyunca yeni 3 petri kabına öncekilerden kurtarabildiğim temiz parçalardan ve kartona aşıladığım 3. mantarın büyümeye başlayan misellerinden aktarmaya karar verdim. Bu sefer önüme bir küçük kap izopropil alkol bir küçük kap %3lük hidrojen peroksit solüsyonu koydum. (Ancak şimdi fark ettim ki bağlantıdaki tarifte %0.3lük hidrojen peroksit demişler ben %3lüğü seyreltmeden kullandım ) Cımbızı önce ateşte ısıtıp alkolde söndürdüm, sonra mantar örneğini alıp hidrojen peroksite daldırıp çıkarıp petri kabına öyle koydum. Bu sandviç yöntemini de denemek için bir kısmını agarı steril bıçakla dikdörtgen kesip üzerine kapatarak yaptım. 3 X 5'er örnekten 15 parça var. Şu anda bazıları hafif pamuklaşmaya başladı. Merakla bekliyorum

Evde besiyeri hazırlamakla ilgili de şöyle bir şey geldi aklıma. PDA'yı hazırladıktan sonra petri kaplarına döküp mikrodalgada çevirsek dökerken yapacağımız kirliliği bertaraf etmiş olabiliriz. Petri kaplarını da cam alıp tekrar tekrar kullanmakta fayda var, kontamine olunca ne yapacağımı bilemedim çöpe attım şimdiye kadarkileri