doku kültürü, orkideler için besiyeri hazırlamak
 

Uzun zamandır orkideler için besi yeri hazırlayabilirmiyim acaba diye kafa yoruyorum.Üç ay gibi bir uğraştan sonra besi yeri için gerekli olan kimyasal maddeleri tamamladım sayılır.Bu besi yeri hazırlama işini daha önce deneyen oldumu başarılı oldumu bilmiyorum. Ama ben denemekte kararlıyım. Ev ortamında ne kadar başarılı olabirim denemek istiyorum.

Fotoğrafları gelişmiş bir makinayla çekmiştim ancak yüklemekte çok zorlandım. Bir haftadır yüklemek için uğraşıyorum. Ancak bugün becerebildimEklenti 564336

Eklenti 564337

Eklenti 564338

Amonyum Nitrat ............. .825 mg.....
Borik Asit ....... .3.10.....mg..
Kalsiyum Klorür Susuz ..................... 166.0 mg
Kobalt klorür hekzahidrat ................0.0125
Bakır sülfat pentahidrat .................. 37,240
Demir sülfat heptahidrat ................. 27,850
Magnezyum Sülfat Susuz ................ 90,350
Sülfat manganez ..........................8.450
Potasyum iyodür ........................... 0,4150
Potasyum Nitrat ......................... 950
Potasyum Fosfat Monobazik ......... . 85.0
Sodyum Molıbdat Dihidrat ................0.1250
Çinko sülfat heptahidrat .................. 5.30
Charcoal......................................... 2000.0
MES (serbest asit) .......................... 1000,0 .......
Miyo-inositol ................................. 100,0 .
Nikotinik asit (serbest asit) .................. 1.0
Pepton Tip I ................................... 2000.0
Piridoksin hidroklorür ....................... 1.0
Sakaroz. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20000,0
Tiamin hidroklorür ............................. 10.0
Tozun 27.3 g ortamı 1 L hazırlamak için gereklidir.

Burada kullanılan makro elementler mikro elementler ve vitaminler tabloda gösterilen miktarlarda tartılıp 1 litre saf suda karıştırldı. 8 gr agar agar ilave edilerek karıştırıldı PH ölçüldü HCI ve NaOH ile PH ayarlaması yapıldı yaklaşık ph 5.6 civarına ayarlandım daha sonra tencerede kaynattım normalde düdüklüde kaynatılsa kontaminasyon açısından daha iyi olurdu. Cam kavanoza bu karışımı döküp soğumaya bıraktım daha sonra mikrodalga fırında 6 dakika bıraktım. Plastik kaplara ve cam petrilere döktüm besi yerleri artık hazırdı

[aEklenti 564342

Eklenti 564343

Eklenti 564344

İnternetten getirttiğim orkide tohumlarını çamaşır suyunda steril edip besi yerlerine yerleştirdim. Birkaçtane orkide dalını ve kökünüde besi yerine yerleştirdim. ayrıca siyah çilek tohumu ve begonya tohumu ve bir çiçek tohumu daha besi yerine yerleştirdim. tüm bunları küçük bir akvaryuma koydum 16 saat 900 lümen ışık veren bir lamba altında bekletiyorum bunu yapalı bir hafta oldu. Ancak çalışma resimlerini birhaftadır yükleyemedim. Nasip bugüneymiş

Eklenti 564345

Eklenti 564346

Eklenti 564311

Eklenti 564312

Isı ? (sabit tutmak için ne kullanıyorsunuz ) Besiyeri hazırlarken ki işlemleri yazabilirmisiniz ?

Fotoğrafların boyutunu bir photoshopp dan küçültürseniz hallolacaktır . Bunu makine üzerinden de yapabilirsiniz ama makinanın ayarını bozmayın bence , internetten bu işi pxlr üzerinden hiçbir değişiklik yapmadan , tekrar kaydederek üst taraftan düzelte bilirsiniz
Kolay gelsin takipteyim

Merhaba Mete bey ilginize teşekkür ederim. Biliyorsunuz orkide tohumlarının çimlenmesini sağlayacak yedek besin depoları yok bu yüzden çimlenme için gerekli besinleri hazır olarak vermek gerekiyor.Bunuda besi yeri hazırlayıp tohumla besinleri buluşturuyoruz. Bu besi yeri TIP ta mikrop üremesinde kullanılır. Yani besi yerinde mikroorganizmalar mantarlar çok kolay ürer ve tohumun çimlenmesine engel olurlar. o nedenle besi yerinin mikroplardan arındırılmış olnası gerekir.

Listedeki gübreleri elementleri vitaminleri hassas elektronik teraziyle tarttım ve bir kavanoza koydum jel haline getirmek için 8 gr agar-agar ilave ettim. 20 gr toz şeker ilave ettim 1 litre su ilave edip PH ölçtüm 3.5 civarında çıktı.Yani asidik bir ortam oluştu PH 5.6 ideal yapmak yükseltmek için az az NaOH parçacıkları ilave ettim. orkideler için ideal ph 5.6 civarı olmalı. Bu agar agar lı karışımı kaynattım. Soğuyunca jel hale geldi. Bu jelleri kavanozla mikrodalgada erittim plastik kaplara koydum. Bu plastik kaplarıda çamaşır suyuyla steril ettim. ayrıca dezenfektan spreyleri kullandım. Akvaryum da ısı ve ışık yönünden daha korunaklılar.orkideler 18-28 derece arasında çimlenebilirler. yaklaşık bir ayda çimlenmeleri lazım.

MOR orkide tohumunda çimlenme var. Birhafta gibi kısa sürede çimlenmesi şaşırtıcı.Gitti gidiyordan getirttiğim bir tohum umarım orkide tohumudur. Besi yerinde kontaminasyon yok şimdilik.

çamaşır suyuyla dezenfekte etmeye üşendiğim cam petri kutularında mantar kontaminasyonları var. dezenfektan sıkıp geri yerine koydum yarın karar vereceğim akibetlerine

Bir haftadır cam kavanozda bekleyen besi yerine, bu orkide saplarını dün diktim. Çamaşır suyu ve bir damla tveen 20 ile dezenfekte ettim

Bu iş üşenme kaldırmıyor :) bir şeyler eksik gibi geliyor bana ama çözemedim belkide okuduklarımı unutmuş olabilirim bence bir daha bilgilerinizi gözden geçirin bence :)

Çok haklısın Mete bey sterilizazyon ve dezenfeksiyon ihmale gelmiyor. Ama napalım bizim ilk denemelerimiz. Bazı şeyleri deniyerek öğrenmek daha kalıcı oluyor. Birkaç besi yeri daha hazırlamam lazım. Kontamine olanların yerine koymak için. MERC alman firmasının kimyasalları çok iyi ama çok çok pahalı örneğin 1 kg şeker 70 Euro, 1 kg chorcoal aktif kömür 70 Euro. Amonyum nitrat 70 Euro oysa Türkiye de amonyum nitrat gübresini 5-10 tl ye alırız. Bu denemelerde başarılı olursam MERC in ürünlerini kilo olarak alabilirim belki. İnternetten çeşitli renklerde orkide tohumu getirttim. özellikle ithal mavi renk olanı merak ediyorum.

Bence bu kadar pahalıya gerek yok sonuçta prof çalışmıyorsunuz ve biyoloji mezunu değilsiniz ! Profosyonel üretim için daahaa çooook denem yapmanız lazım :) dezenfeksiyon çok önemli örneğin diş hekimisiniz siz dezenfekte edilmemiş bir bulaşıcı hastalıgı olan hastanın ağzında kullandığınız aletleri başka hastaya düzgün dezenfekte etmeden kullanırmısınız ? Çevap tabi ki hayır .. onun için başlamadan ilk önce steril olup
Daha sonrada diğer işlemlere devam etmelisiniz

Doku kültürü çooook uzun sürede yapılan bir işlem herşey yolunda iken en sona geldiğinizde kontemine olursa ya da hastalıklı olursa hem emeginiz boşa gider hemde çok üzülürsünüz..

( Diş hekimi olsuğunuza göre korkmazsınız okumaktan :) birkaç döküman makale vs daha tarayın bence )

Evet sonuçta sterilizasyon ve dezenfeksiyon kurallarına uyunca doku kültürü olayı evde olabiliyor mu denemiş olacağız.

Çimlenmekte acele eden mor orkide tohumunun iki günde katettiği yolu göstermek açısından son durumunun fotoğrafı.

Mor orkidenin bulunduğu besi yeri ve bir tüp hariç bütün besi yerleri kontamine olduğu için hepsini attım. Bu sefer daha dikkatli besi yerleri hazırladım. çamaşır suyuna tween 20 de ilave ettim. mavi, beyaz-pembe, saf beyaz, mavi, sarı ve kelebek orkide tohumlarından yeniden ektim. Sarı ve kelebek orkide tohumları gözle çok zor görülecek kadar küçük olduğu için sterilizasyonda zorlandım. Başka bir besi yerine mavi haseki, katmerli beyaz begonya,peygamber çiçeği ve yeşil çilek ektim İnşaallah sonucu hep birlikte göreceğiz

Çimlenen tohumun yeni hali beni sevindirmişti ama onunda 2. haftada kontamine olduğunu görmek beni üzdü. Kontaminasyonu durdurmak içindezenfektan sprey sıktım. Ben fotoğraf çekmek için kapağını açtığımdan da kontamine olmuş olabilir.

Sn asiltürk tohumları seyreltimiş camaşırsuyu ile dezenfekte ediyormusunuz? Kullandığınız petri kaplarını ya da vs düdüklü ya da mikro dalgada dezenfekte ediyprmusunuz ¿ Kapların bulunduğu ortam nasıl bir yer ? Birde çalışma yaptığınız alanı işe başlamadan önce çamaşır suyu ile silip havayada sprey dezenfektan sıkıp mı çalışıyorsunuz yoksa alalade gelişi güzel aldığınıx gibimi çalışıyorsunuz ?

Son olarakda tohumun orkide tohumu olduğuna eminmisiniz ? :D :)

Sayın Tilki Mete sadece orkide tohumları ve plastik kavonozları seyreltilmiş çamaşır suyuyla dezenfekte ettim. Diğer çiçek tohumlarını çamaşır suyuyla dezenfekte etmedim zaten ilk çiçek tohumlarının olduğu plastik kap kontamine oldu. cam petrileride yüzey dezenfektanı sprey ile dezenfekte ettim onlarda enfekte oldular. belli zaman sonra hepsi enfekte oldular ve attım sadece elimde 3 çubuk dal ve bir kök parçası kaldı onlarında jelleri eridi jellerini değiştirdim. Bu çubuk orkide dalı parçalarındaki gözlerden yaprak çıkma belirtileri var gibi. Bütün bu çalışmaları salonda masanın üzerinde yapıyorum.jelleri de düdüklüde değil normal tencerede hazırladım.oda sıcaklığında cam kavonozlarda stok ettim. 15 gündür cam kavonozda bekleyen jellerde kontamine yok.mikro dalgadada steril ettim

Elimdeki jeller henüz bitmediği için mikrodalgada eritip kullanıyorum. yeniden yaptığım ekimlerde bu sefer daha yoğun çamaşır suyuyla ve tween 20 damlatarak plastik kapları steril ettim. orkide ve çiçek tohumlarınıda steril ettim. havayı çok steril etmedim.daha dikkatli davranarak steril kapların ağzını tohum eker ekmez hemen kapattım.kapların yüzeylerini ve ellerimi sprey yüzey dezenfektanlarıyla dezenfekte ettim.Çimlenen tohumun orkide tohumu olduğundan emin değilim ama internetten değişik firmalardan 5-6 çeşit orkide tohumu aldım. çimlenen tohumuda mor orkide diye almıştım. bu sefer dezenfeksiyona daha özen gösterdim. sadece çamaşır suyunu ne kadar seyreltmem gerektiğini bilmiyorum.çünkü bütün çamaşır sularında % 5 sodyum hipoklorür var. Ayrıca tohumları dezenfekte edip besiyerine ekince yoğun fenolik eksüdasyon oluştu. Bu eksüdasyonun neden oluştuğunu bilmiyorum. eksüdasyona karşı aktif kömür ve askorbikasit öneriliyor. aktif kömür parçacıkları kullanmıştım ama bunlar jel içinde hem erimedi hemde homojen dağılmadı dibe çöktüler. fenolik eksüdasyonu aktif kömür absorbe etmesi gerekirdi. f. eksüdasyonun çimlenmeye nekadar zararı olur bilemiyorum.Bu seferde başarılı olamazsam bayrandan sonra yeniden ve daha dikkatli bir toz karışımı hazırlayacağım

Bir hafta önce ekimini gerçekleştirdiğim sarı orkide tohumlarında çatlamalar başladı sanırım birkaç günde çimlenme gerçekleşecek.Diğer saf beyaz mavi ve kelebek orkide tohumlarında bir değişiklik henüz görülmüyor. Doku kültürü ve çimlenme konusunda deneyimli veya bilgisi olan arkadaşlar varsa bizimle paylaşırlarsa bizde faydalanmış oluruz

Öncelikle buradan başlayalım ..

Tohumun sterile edilmesi ve ağara alınması .


bu mesajı da okuduğunuzu tahmin ediyorum yinede tekrar gözden geçirmeniz halinde belki o eksik şeyi bulursunuz .


tohumdan sonra bunu da
denemelisiniz :D bence tohumdan daha kolay en azından sterile etmesi kolay :D

şimdilik aklıma gelen bölümler daha sonra tekrar bakıp birkaç link daha eklerim . :D aman yanlış anlamayın doku kültürü ve tohum çimlendirme hep merak ettiğim özendiğim iştir :)

konuları bilgim dahilinde ben özetleyicektim ama az yazıyla çok şey anlamayı seviyorum bu yüzden pek anlaşılmıyor :D

Sayın Tilki Mete İlginizden ve yardımlarınızdan dolayı çok çok teşekkür ederim. Eklediğiniz videoları seyredince benimde video çekesim geldi. Ama benim ortamım biraz ilkel kaçardı herhalde.Neyazıkki bizimde doku kültürünün nasıl yapıldığını uygulamalı anlatan türkçe videomuz bile yok.eklemiş olduğunuz videolar ve bilgiler benim için yol gösterici olacak. o yüzden zaman buldukça birkaçkez izliyecceğim. Bir doktor arkadaşım ve ben havadan kontamine olduğunu düşünüyoruz. kontamine olanlarda iğrenç bir koku oluşuyor. Aklımdan geçen şey kontaminasyonu engel olmak için besi yerini hazırlarken mantarlara etkili bir antibiyotik karıştırmayı düşünüyorum. Ama bu antibiyotik çimlenmeyi etkilermi deniyeceğiz. Belki bu sayede kontaminasyondan kurtulabilirim. onun için uygun bir antibiyotik seçmem lazım.

Güncelleme yok mu ? Tohumlatın fotoğrafını atabilirmisiniz ?