Petri kabında mantar miseli üretmek

[asduskun]

Orijinal Mesaj Sahibi Doku_Kültürcü

Daha önce hiç hazır besi yeri kullanmadım. Yüksek lisans yaparken patates dekstroz agar ortamını kendimiz eldeki ham malzemeden yapardık. İşlem sırası:

1. 200gram patates küçük (1x1x1cm mesela) küpler halinde doğranır.

2. 1litre musluk suyu içerisinde bir saat kaynatılır. Soğuduktan sonra süzülür.

3. Süzülen sıvı üzerine 1litre oluncaya kadar su ilave edilir.

4. Bu sıvıya 20gram dekstroz (glikoz) ilave edilir. Eriyinceye kadar karıştırılır.

5. En son basamak, 20gram agar ilave edilir ve otoklava yerleştirilip 121°C sıcaklık ve 1,2Kg/cm2 basınçta 20 dakika sterilize edilir. Otoklav çok pahalı bir cihaz. Ayrıldığım laboratuvara son sistem bir adet alınmıştı, fiyatı 8000TL idi. Siz bunun yerine mutfağınızda kullandığınız düdüklü tencereyi kullanacaksınız. Standart bir düdüklü tencerenin çıkabildiği sıcaklık 110°C'dir. Bu nedenle düdüklü tencere fış sesi çıkardıktan sonra 30dakika ocak üzerinde tutmanızı öneririm. 30 dakikanın sonunda, sıcaklığı 50-60°C oluncaya kadar soğumaya bırakın (daha fazla soğumasın, agar katılaşır), yine daha önceden düdüklü tencere içerisinde sterlize ettiğiniz cam perti (petri kapları sterilize edilmeden önce içlerinde 5ml su kalacak şekilde ıslatılmalıdır) kapları içerisine döküp kapağını kapatacaksınız ve soğumasını bekleyeceksiniz. Bu işlerin, steril toz içermeyen bir ortamda gerçekleştirilmesi gerekmektedir. Aksi taktirde, ev içerisinde bolca bulunana diğer küf sporlarının hazırladığınız agarlı ortamda geliştiğini göreceksiniz. Pratik olarak kullanabileceğiniz 45litre hacimdeki bir akvaryum olabilir. Akvaryumun açık kısmını yarısına kadar kapatacak şekilde bir cam parçasını silikonla yapıştırmanızı öneririrm. Bu, çalışacağınız akvaryum içerisine hava hareketini önemli ölçüde engeller. ve küf sporlarının çalışmanıza ulaşmasına engel olur. Agarı gıda tipi agar olarak Türkiye'den temin edebilirsiniz. Mesela; Kıvam Arttırıcılar Kategorisi - Hammaddeler.com Online Satışta 8. Yıl! Yüz gramı 15,69TL. Kolay gelsin...

Çok teşekkür ederim baya açıklayıcı aslında ama aklımda bir iki soru kaldı

1- besiyeriyi düdüklü içine nasıl bir kapla koymamiz lazım? Mesela kavanoz olur mu?
2- bunun ağzı düdüklüdeyken açık mı olmalı kapalı mı?

3- petri kaplari düdüklüde ayrı bir işleme tabi tutuluyor anladığım kadarıyla içlerinde 15 ml suyla bunların da kapakları açık mı kapalı mı olmalı düdüklüde? Ve düdüklüden çıkarırken çıplak elle mi çıkartıyoruz? Kurumalarini nasıl sağlıyoruz kaplarin?
4- akvaryumu dediğiniz şekilde hazırladığımızda içinde illaki oda içerisinden aldığı bir miktar hava kalacaktır bu sorun olur mu bunu temizlemek gerekir mi?

5- Son olarak patatesleri kaynattigimiz suyun musluk suyu olması sorun olmaz değil mi? Veya damacana şu? Bazı yerlerde distille su diyolar da

Tekrar teşekkür ederim




Sent from my iPhone using Tapatalk

[Doku_Kültürcü]

Orijinal Mesaj Sahibi asduskun

Çok teşekkür ederim baya açıklayıcı aslında ama aklımda bir iki soru kaldı

1- besiyeriyi düdüklü içine nasıl bir kapla koymamiz lazım? Mesela kavanoz olur mu?
2- bunun ağzı düdüklüdeyken açık mı olmalı kapalı mı?

3- petri kaplari düdüklüde ayrı bir işleme tabi tutuluyor anladığım kadarıyla içlerinde 15 ml suyla bunların da kapakları açık mı kapalı mı olmalı düdüklüde? Ve düdüklüden çıkarırken çıplak elle mi çıkartıyoruz? Kurumalarini nasıl sağlıyoruz kaplarin?
4- akvaryumu dediğiniz şekilde hazırladığımızda içinde illaki oda içerisinden aldığı bir miktar hava kalacaktır bu sorun olur mu bunu temizlemek gerekir mi?

5- Son olarak patatesleri kaynattigimiz suyun musluk suyu olması sorun olmaz değil mi? Veya damacana şu? Bazı yerlerde distille su diyolar da

Tekrar teşekkür ederim




Sent from my iPhone using Tapatalk

Besi yerini düdüklü içerisine cam erlenmayer ya da cam balon (500ml)'lik içerisinde koyabilirsiniz. Laboratuvar malzemesi satan yerlerden temin edebilirsiniz. Ağzına pamukla tıkaç yapıp üzerini de aluminyum folyo ile örterseniz soğuma sırasında ağız kısmından içeriye küf sporları girmez. Petri kaplarını düdüklü tencere içerisine koyarken, içlerinde 5ml su bulunmasının nedeni, petri kabının içerisinde sterilizasyon sırasında canlı buhar oluşturup enfeksiyon kaynaklarını yok etmek amaçlanır. Bu 5ml suyu koymazsanız, bu hacim ölü hacim olacağı için enfeksiyon kaynağı sporlar canlılıklarını muhafaza ederler. Ayrıca, petri kaplarını polipropilen (jelatin torba) bir torba içerisine koyup içerisine yine 10-20ml su ilave ederek tam olarak sterilizasyonu sağlayabilirsiniz. Torba, petrileri düdüklü tencereden çıkartmanızda kolaylık sağlar. Steril cerrah eldiveni giyebilirsiniz. 5ml su fazla bir miktar değil sterilizasyondan sonra kurutmuyoruz. Akvaryum içerisinde petri kapağını aralayıp kenardan yavaşça petri içine döküyoruz. Petrileri üst üste istifliyoruz.
%70'lik etil alkol alın. Bunu bir su püskürtücüsü içerisine doldurun. Çalışmaya başlamadan önce akvaryumun içerisine püskürtün. Akvaryum içerisindeki havada asılı bulunması muhtemel küf sporlarını yüzeye indirecektir. Sonrada çamaşır suyu ile ıslatılmış sentetik bir bezle bu yüzeyi silin. Ege Üniversitesinde yüksek lisans yaparken, Agaricus bisporus ile çalıştığım dönemde çeşme suyu kullanmıştım (1996). Bir sorun oluşturmamıştı.
HEPA filtreli bir kabin yapmanızı öneririm. İşkence çekmenizin önüne geçer (tecrübe konuşuyor). http://www.agaclar.net/forum/orkide-...mi/37576-5.htm bağlantısında steril çalışma için HEPA kabini yapımı ile ilgili bir gönderi yapmıştım. Okuyun, belki yapmayı düşünürsünüz. Kolay gelsin...

[asduskun]

Orijinal Mesaj Sahibi Doku_Kültürcü

Besi yerini düdüklü içerisine cam erlenmayer ya da cam balon (500ml)'lik içerisinde koyabilirsiniz. Laboratuvar malzemesi satan yerlerden temin edebilirsiniz. Ağzına pamukla tıkaç yapıp üzerini de aluminyum folyo ile örterseniz soğuma sırasında ağız kısmından içeriye küf sporları girmez. Petri kaplarını düdüklü tencere içerisine koyarken, içlerinde 5ml su bulunmasının nedeni, petri kabının içerisinde sterilizasyon sırasında canlı buhar oluşturup enfeksiyon kaynaklarını yok etmek amaçlanır. Bu 5ml suyu koymazsanız, bu hacim ölü hacim olacağı için enfeksiyon kaynağı sporlar canlılıklarını muhafaza ederler. Ayrıca, petri kaplarını polipropilen (jelatin torba) bir torba içerisine koyup içerisine yine 10-20ml su ilave ederek tam olarak sterilizasyonu sağlayabilirsiniz. Torba, petrileri düdüklü tencereden çıkartmanızda kolaylık sağlar. Steril cerrah eldiveni giyebilirsiniz. 5ml su fazla bir miktar değil sterilizasyondan sonra kurutmuyoruz. Akvaryum içerisinde petri kapağını aralayıp kenardan yavaşça petri içine döküyoruz. Petrileri üst üste istifliyoruz.

%70'lik etil alkol alın. Bunu bir su püskürtücüsü içerisine doldurun. Çalışmaya başlamadan önce akvaryumun içerisine püskürtün. Akvaryum içerisindeki havada asılı bulunması muhtemel küf sporlarını yüzeye indirecektir. Sonrada çamaşır suyu ile ıslatılmış sentetik bir bezle bu yüzeyi silin. Ege Üniversitesinde yüksek lisans yaparken, Agaricus bisporus ile çalıştığım dönemde çeşme suyu kullanmıştım (1996). Bir sorun oluşturmamıştı.

HEPA filtreli bir kabin yapmanızı öneririm. İşkence çekmenizin önüne geçer (tecrübe konuşuyor). http://www.agaclar.net/forum/orkide-...mi/37576-5.htm bağlantısında steril çalışma için HEPA kabini yapımı ile ilgili bir gönderi yapmıştım. Okuyun, belki yapmayı düşünürsünüz. Kolay gelsin...

Teşekkürler bu arada ben de şöyle bir bilgi buldum meb kitaplarında belki işinize yarayabilir

bir de youtube videosu

https://youtu.be/V6ddcTGdAJw

Sent from my iPhone using Tapatalk