Bitki Doku Kültürü Çalışmaları

[Cansunarya]

Orijinal Mesaj Sahibi praecox

Sayın Cansunarya,

Dünki özel telefon görüşmemizde de değindiğiniz centrıfüj ile sterilizasyon konusunda bende burada bildiklerimi paylaşıp bu konuda bildiklerimi paylaşayım.

Telefondan da belirtiğiniz gibi belli bir devir ile bakterilerin hücre çeperlerini parçalamak sureti ile imha etmek mümkün.
Benim üniversitedeki araştırmalarımın birinde karaciğerin bazı enzimlerini elde etmemiz gerekmekteydi. mikrosol ve cytochrom p 450 gibi. bunun için belli bir aşamada hücreleri kaba bir parçalamadan sonra ince bir parçalama için centrıfüjde çok hassas belli bir devirde bazı hücreleri de praçlayıp bu enzimleri açığa çıkarymamız ve ayrıştırmamız gerekiyordu.
Buradan türetme ile bacterileri de bu şekilde parçalayıp yok edebiliriz. Ancak küf ve maya sporları bu müdahaleden zarar almadan kurtulabilir. Bir de bu esnada unutmıyalım ki orkide tohumları da ki bu sıvının içindeler ama bakterilerden daha sert bir yapıya sahip olduklarında dayanabilirler.

Kısacası fazla derine dalmadan devrini ayarlamak gerekir ve de bu şekilde uygun bir devirde daha steril tohumlar elde etme imkanımız olur. Bu konuda elimde maalesef ki bir araştırma yok.
Malumunuz üzre kimya ve biokimya veya diğer bilimler de de theori ve pratik çok iki değişik kavramdır ve theorinin deneylerle kanıtlanması tekrarlanabilirliğinin de desteklenmesi gerek.
Theori güzel bunu explizit olarak denemelerle destekliyebilirsik bu çok daha güzel.

Saygılarımla

Hocam,

Phal tohumları için tekrardan çok teşekkür ederim. En kısa zamanda sizlerle burada tohum gelişmelerini paylaşmak için sabırsızlanıyorum .

Bazen çalışmalarımda kontamine olduğunu bildiğim dışkı gibi materyalleri yüksek devirli santrifüj işleminine tabii tutuyorum. 15.000 devirde 1 dk tuttup hücrelere ektiğim numunelerin hiçbirinde kontaminasyon şekillenmiyor. Benide küf ve maya sporları düşündürüyordu (ki dışkıda çok bulunurlar), ama şimdiye kadar onlarında geliştiğini görmedim, etkileniyorlar galiba..

Sizinle konuştuktan sonra tohumların santrifüje dayanıp dayanamıyacaklarını anlamak için küçük bir deneme yaptım.

Tohumları mikroskopta inceledikten sonra küçük bir miktarını sulandırarak 15.000 rpm de önce 1 dk santrifüj ettim. 1. dk dan sonra mikroskopta baktığımda hemen hemen hiçbir değişiklik yoktu.
2 dk daha santrifüje tabii tuttum, bu sefer bazı tohum kapçık uçlarının kırıldığını hafif dağıldığını gördüm ama genel bütünlük bozulmamıştı ve tohumun ortasında görülen yoğun bölgede dağılmamıştı. Bu şekilde çimlenmelerinde bir sorun oluşmazmış gibi geldi bana.

Sertliklerini anlamak için mikroskopta bakarken pipetin ucuyla ezme denemesi yaptım, ilgiçtir, hemen ezildi ve içinden o yoğun bölge dediğim yerden bir sürü küçük partikül yayıldı. Patlayan tohum oldukça farklıydı diğerlerinden. Santifüj sonucu patlasaydı mutlaka belli olurdu. Bunun sonucunda tohumların santrifüjden etkilenmediğine karar verdim. Fotoğraflarını çektim, yarın ekliyebileceğim görüntüleri.

Yine yarın tohumları hem hidrojen peroksitli, hem de santfifüjlü yöntemlerle steril edip kültüre edeceğim. Bu işlemlerinde fotolarını bir aksilik olmazsa yarın yüklerim.


Saygılarımla