Bitki Doku Kültürü Çalışmaları

[saydemir]

Çok eğitici ve açıklayıcı bir çalışma olmuş/oluyor. Elinize sağlık cansunarya.

[Cansunarya]

Cesaretlendirici destekleriniz için teşekkürler..
Sayın ephesos,
Tüpleri şu anda laboratuarımda tutuyorum, zaten steril bir ortam olduğu için sorun çıkmıyor. Ev ortamında da baktım onlara, eğer hava sirkülasyonu olmayan bir yere koyarsanızda pek sorun çıkmayacaktır. Yalnız mutfağa yakın olmasın malüm en fazla kontaminasyonun bulunabileceği alan.
Sayın warbanik, bende Erkan hocam gibi düşünüyorum, kültürlerin sonucu kötüde olsa durum hakkında fotolu bilgilerinizi paylaşırsanız diğer arkadaşlarda yararlanır, zira sizin uyguladığınız teknik ev ortamında daha kolaylıkla gerçekleştirilebilir.

[ibni-avvam]

zaten var olan aşkı alevlendirdiniz çok teşşekkür ediyorum çalışmalarınızı bizlerle paylaştığınız için

[Cansunarya]

Erkan hocam,
Elimde tween80 ve Dezen ticari isimli benzalkonyum-chlorit de var, toksik olabileceğini düşünerek 20 ile başlamıştım, dezenfektan kullanmak hiç aklıma gelmemişti. El ve cilt dezenfeksiyonunda kullanıldığına göre sanırım sorun yaratmayabilir. İlk çalışmamda bu ikisinide deneyeceğim, çok teşekkürler.. Siz hiç denemediniz galiba değil mi? Hocam sizin çalışmalarınızı görmek mümkün olurmu acaba burada
Bu arada ilk denemelerim hidrojen peroksitin değişik derişimlerini kullanarak yaptım, pek başarılı olmadığını gördüm, sanırım bu şekilde dezenfeksiyonla hiç uğraşmamak gerek..
okuduğum bir makalede çiçek saplarının genel olarak kullanılabildiği yazıyordu, bende yine parçalara kıymamak adına goncaları bile kültüre aldım. Aslında pek birşey çıkacağını ümit etmiyorum ama bakalım ne olacak
Keiki-boost u internette araştırdım gerçekten güzel bir ürüne benziyor, sanırım jelimsi bir kıvamda değilmi, eğer sıvı olsaydı enjektör filtrelerden geçirilerek steril edilebilirdi. Veya sulandırmak mümkün olursa yine böyle kullanılabilir, mikrodalga tam olarak steril etmiyor malesef. Belki yapısı otoklav edilmeye uygundur. Ben daha önceden kullanılmış plastik kapları mikrodalgada steril etmeyi denedim ama hepsindede kontaminasyon oluştu. Sadece önceden steril edilmiş agarı eritmek için kullanılabilir. Keiki-boost u nasıl temin edebilirim acaba, denemek isterim gerçekten..

[Cansunarya]

Bunlar kontaminasyonsuz 10 günü geride bırakan orkide nod kültürleri..kültürler kesilen kısımlarda fenolik maddeler salgılamaya başlıyor ve bu kısımlar siyahlaşıyor. Bu hale gelen kültürlerinin bir an önce yeni agara geçilmesi gerekiyor yoksa bu kısımlardaki dokular ölebiliyor.
1. ve 2. fotoda yan çiçek sapından alınan kesitte kapçığı kaldırılmamış gözün agar ortamında büyüyerek bu kapçığı kaldırması görünüyor. Ayrıca dip kısımda agardaki kararmalar fenolik eksudasyonu gösteriyor
3. fotoda bu şekildeki kültürlerin agardan çıkarılarak yeni agar kabı için hazırlanışı var
4. fotoda büyüyen gözler görülmekte, umarım keiki çıkar, çiçek sapı çıkaracağından korkuyorum
5. de fenolik eksudasyonlu agar içeren atık tüpler

[Sergüzen]

Orijinal Mesaj Sahibi Cansunarya

Pardon, foto eklediğimi unutmuşum bunlar Gerbera ve Galla çiçeklerinin saplarından hazırladığım kültürler, hazıra kaçtım tek tek uğraşmak istemedim, bu yüzden 24 lü gözlerdeler. Ama farkettimki bu tür süngerimsi dokulu ve tüylü bitkiler yeterince çamaşır suyuna maruz kalamıyorlar, bende bundan sonrakilere yüzey geriliminin düşmesi ve sterilizasyonun tüm yüzeylerde etkili olması için bir damla Tween 20 (bir çeşit noniyonik deterjan) ilave ettim. Daha etkili oldu. Aşağıda çeşitli küf kontaminasyonları görülmekte..

Sterilizasyon için hidrojenperoksit kullanabilirmisiniz? Bir çok alanda çamaşır suyunun yerini almış durumda.

[Cansunarya]

Pasajın son aşamasında orkide nod kültürleri yine steril bir ekipmanla yeni agarlı ortama geçilir (1. foto) vee beklemeye devam edilir.. Kültürleri evde tuttuğum zamanlar gece 4 te bile kalkıp acaba bir gelişme varmı diye bakıyordum
2. ve 3. fotolar; farklı fenolik eksudasyon görüntüleri, ortadaki artık gözden çıkarılmış, uçları fenolik eksudasyondan zarar görmüş orkide sap doku kültürü

[Cansunarya]

Sayın Sergüzen, 34 nolu mesajda da belirttiğim gibi bu şekilde steril ettiğim kültürlerde pek randıman alamadım, üstelik taze dokuyu aşırı derecede tahribata uğratıyor, bitki gözlerinde bence tehlikeli, çoğunlukla hidrojen peroksitin kullanıldığını biliyorum ama ben çamaşır suyunu daha etkili ve güvenli buldum

[Sergüzen]

Bildiğiniz gibi hidrojenperoksit yüksek konsantrasyonlarda deriyi tahriş ediyor, fakat düşük konsantrasyonlarda burun içine kanamayı durdurmak için tampon olarak tatbik edilebiliyor. Yani tahriş etmiyor. Bugün tıpta desenfektan olarak geniş bir alanda kullanılıyor. Bitkilerde neden olmasın? Acaba doğru konsantrasyonu mu yakalayamadınız. Bu konuda birşeyler bulursam size aktaracağım.

[Cansunarya]

Aşağıdaki sitede tavsiye edilen derişimleri kullandım, farklı derişimler ve sürelerde denedim. Tabiiki kullanılabilir ama ben kendi adıma sodyum hipokloritten memnunum, daha çok farklı sterilizasyon yöntemleri var bu webde bulabilirsiniz ama denediğim ve çalışan bir yöntem varken başa dönmeyi düşünmüyorum, kontaminasyonlar tween 20 eklenmesiyle ortadan kalktı bundan sonra merak ettiğimden dolayı tween 80 ve dezenide deneyeceğim

[Cansunarya]

http://www.orchideenvermehrung.at/cg...regulators.htm
node culture , download ve hints bölümünde bulabilirsiniz

[Sergüzen]

Oberflächensterilisation
Zur Sterilisation der Sprosssegmente wurde Quecksilberchlorid (HgCl2) 0,1%ig, Tween 20 und dreimal Aqua dest. verwendet (nach PIERIK, 1987; GEORGE & SHERRINGTON, 1984).

Bu yazı bir tezden aktarıldı. Avustralya akasyalarının üretim teknikleri ile ilgili. Yukarıda kısaca, sterilizasyonda civaklorür ve Tween 20 kullanılmiş ve üç defa da destile su .

[ephesos]

Sayın Cansunarya , çok bilmişlik yapmak istemem ama agara eğer köklendirici hormon eklemediyseniz kaiki yerine çiçek sapı çıkaracaklar gibi.

[Cansunarya]

Rica ederim Ephesos, Orkideler için kullandığım medium büyüme hormonu katkılı onlarda bir sorun olmayacak inşallah, sadece karanfil ve diğer bitkiler için kullandığım MS besi yerinde hormonlar yok( basal medium), bugün onlara agar değiştirdim artık kökleneceklerini umuyorum..

[Cansunarya]

İnternette; Sayın Buket Örücü nün hazırlamış olduğu 'Asmada Embriyo Kültürü' isimli teze ait sunu görüntülerini buldum, aynı sununun pdf formatıda var. Güzel bir çalışma olmuş, geniş bir bilgide var. İlgilenen arkadaşlar aşağıdaki siteyi ziyaret edebilir.
emyo.sdu.edu.tr/link/Sontez.ppt

[praecox]

Sayın Cansunarya,

Eski kayıtlarımı tekrardan gözden geçirdim, ancak bir yanlışlık olmuş ben Tween 60 kullanmışım. Aklımda 80 kalmış... ( yani Polysorbat 60 olacak)
Ben artık laboraturda çalışmıyalı uzun zaman oldu. Geçmişteki deneylerimin resmedemedim. Zaten fotoğraf makinelerinin lab.a girişi de yasaktı. (özel bir ilaç şirketi olunca.. ) kaldı ki o zamanlar cep telefonları fotoğraf makineli dahi değillerdi adeta el bombası büyüklüğünde 6 saate pili biten türdendi. Microbioloji labı olan arkadaşlara da bu şekilde bir rica ile zahmet vermek istemedim. Laminairflowu olmıyan bir kabinde çalışmak da bu zamana kadar ilkel geldi bana. Kısacası bir kaç yıldır bu tarz ekimlerden uzak kaldım.
Ancak yeniden burda eski tanıdık alet edevatları görünce eski aşkım kabardı. sigmadaki kaydımı açtırdım sipleri verdim görecez bakalım ev şartlarında "taka-tuka" ne kadar başarılı olacağız. Bazı rahatlıklar olmayınca alşkın eller dahi bir birine dolanabiliyor...

[Cansunarya]

Hocam tween 60 da bulabilirim sanırım. Bu arada mikrotomu soruşturdum, bıcakları steril edilebilir, kabinede koyabilirim cihazı, fakat; normalde parafilm blok tutucunun 2 cm lik genişliği varmış.. dokuyu nasıl buraya tutturmak gerektiğini bilmiyorum, birşekilde oturmasını sağlamak gerekiyormuş.
Çalışmalara başlamanıza sizin adınıza hem sevindim hemde heyecanlandım, kimbilir o güzelim hibrid orkidelerinizden neler elde edeceksiniz, bu tür çalışmaları ben bisiklete binmeye benzetiyorum, hocam deneyimli bir eller asla unutmaz, mukadderatları vardır ben başarılı olacağınıza ve çalışmalarınızı burada göreceğimize şimdiden inanıyorum..
Saygılarımla

[Cansunarya]

1. pasaj sonrası yaklaşık bir hafta geçti, nod kültürlerinin agarını yine fenolik eksudasyondan dolayı yeniledim, bu arada bebeklerim oldukça büyüdü Şu anda 9 taneler.. eğer bir hafta içinde kök çıkarırsa kaorcal aktiviteli agara geçmeyi düşünüyorum.

[ephesos]

Hocam kontiminasyona dikkat nasılsa elinizin altında bir laminair flow var , yapraklanmadan köklenirseler bir mutasyon oluşurdu sanırım .
Başarılarınızın devamını dilerim hocam , takipteyim.

[Selahattin Yılmaz]

Shunshine blue'mu çoğaltma konusunda nasıl bu başlığı kıskanarak izlediğimi bilemezsiniz

[Cansunarya]

Selahattin hocam, umarım sizde en kısa zamanda likapalarınızı çoğaltırsınız, acaba Türkiye de bu konuyla ilgilenecek, yardımcı olacak doku kültürü labı varmı?
Sayın Ephesos, Kalanchoe yaprak parçalarından hazırladığım bir kültür bu aralar kök uzantısı vermekte, (foto pek net değil ama ilerleyen günlerde tekrarlarım) yani kültürün yaprak çıkarmasına gerek yok, hmm belkide kültürün kendisinin yaprak olmasından dolayı kök çıkarıyordur nedersiniz

[ephesos]

Aynen öyle hocam phelenaopsis gözlerinin önce yapraklanması gerek çünki kararsız gözü yapraklanarak kaikiye zorluyoruz , yaprak kültürlerde eğer kökten önce tekrar yaprak vermeleri işimize gelmez yani hocam bu kök yaprak olayı kültürümüzün niteliğine bağlı.
Maşallah , hocam sizde birşey bırakmamışsınız elinize negeçerse hop tüpe.

[Selahattin Yılmaz]

Orijinal Mesaj Sahibi Cansunarya

Selahattin hocam, umarım sizde en kısa zamanda likapalarınızı çoğaltırsınız, acaba Türkiye de bu konuyla ilgilenecek, yardımcı olacak doku kültürü labı varmı?...

Var ancak 100 binlerle likapa siparişi alınca hem başka likapanın yüzüne bakmıyorlar hemde doku kültürü ilede olsa çoğlatılmasının zorluğundan kabul etmek istemiyorlar. Ancak çalışmalarım devam ediyor, edecek.

[Cansunarya]

Çiçekli ne kadar bitki varsa hepsinin kültürünü yapmak istediğimi söylemiştim,azimle devam ediyorum, gözüm çiçekçilerdeki diğer bitkilerde, başarılı olursam protoplast hücre kültürüne geçmeyi istiyorum. Bu arada çalışmaların videolarını da çekebilirim ama forma eklenebiliyormu, youtube da kapandı?

[Selahattin Yılmaz]

http://www.ktunnel.com/ üzerinden youtubeyi açabilirsiniz. Aşağıda açmak istediğiniz link için adres bulunuyor gerçi o yotube yazılı olacak orda sadece "begin browsing" tıklamanız yeterli **** açılmayan başka site varsa adresi yazıp giriş yapabilirsiniz ktunnel üzerinden istediğiniz site açılacaktır.

[Cansunarya]

Çok teşekkürler, en kısa zamanda güzel videolar koymayı düşünüyorum . Türkiye den konu ile ilgili bir görüntüde buldum.
http://www.ktunnel.com/index.php/101...fd41b27f16782#

[ephesos]

Sayın Cansunarya hocam , phelenaopsis nod kültürü için hangi besiyerini tavsiye edersiniz
(MS ,B5 ,LS )? **** bunların , hangisinin netür bir modifikasyonunu ?
Başarılı olduğunuz besiyeri **** uygun modifikasyonun konsantrasyonunu bizimle paylaşır mısınız ?
Teşekkürler.

[Cansunarya]

İyi günler, bir süredir Afyon daydım, bugün geldim..
Sayın Ephesos, Orkide kültürü için geliştirilmiş farklı markalarda besi yerleri var, bunlar literatüre ilk kim eklemişse o isimle anılıyor, aynı ürünü farklı firmalarda farklı isimlerle bulabilmek mümkün. Sigma benim kendi alanımdada kulladığım, güvendiğim bir marka, bu yüzden bunu tercih ettim.
Sigmanın Phytamax tescilli orkide besi yerleri var (3.) katoloğa baktığımda MS besi yerlerini tamamen ayrı alana aldıklarını gördüm. Sanırım benim kullandıklarım MS den farklı, Knudson C nin besi yerinden modifiye edilmiş, ama geniş bir şekilde araştıramadım, emin değilim, belki hocalarımız daha iyi bilirler.
Aşağıda kullandığım iki besi yerinin bileşimleri var. Ben henüz ilk denemelerim olduğu için bunlar üzerinde hiç modifikasyon yapmadım. Pdf lerin 2. sayfasında hangi oranlarda nasıl hazırlandığı bildirilmiş. Anlayacağınız gibi ekstra birşey yapmayıp tamamen hazıra kaçıyorum, Türk usulü
Phytamaxlar arasında muz veya hindistan cevizi ekstraktlı olanları var, aslında çoğu literatürlerde oldukça başırılı olan besi yerleri bunlar. İleride onlardanda alıp deneme yapmak istiyorum. Size daha önceki mesajlarda web adresini verdiğim Lotte ve Thomas yöntemini tavsiye ederim, eğer prosedürde veya çeviride sıkıntınız olursa da yardımcı olabilirim.


http://www.sigmaaldrich.com/sigma/da...t/p6793dat.pdf
http://www.sigmaaldrich.com/sigma/da...t/p6668dat.pdf
http://www.sigmaaldrich.com/sigma/ge...id%20media.pdf

[Cansunarya]

Geçen hafta çarşamba çekilmiş pasaj fotolarını yeni yayınlayabiliyorum. Tüplerde fenolik eksudasyonun yanısıra opaklaşmada mevcut. İki kültürden biri iki küçük yaprağa sahip, diğeride henüz yaprak çıkarıyor. Bİr kültürde de (4.) çiçek sapına dönüşecekmiş gibi bir görüntü var.

[Cansunarya]

Bu aşamada toplam 9 nod kültürünün pasajı yapıldı. Kültürleri yine steril bir ortamda çıkardıktan sonra 7 tanesini henüz yaprak gelişimi olmadığı için tekrar P6793 besi yerine aldım. 2 taneside (biri iki yapraklı) kök gelişimi için P6668 aktif kömür içeren besi yerine geçtim. Ne kadar heyecanlandığımı anlatamam, çook mutluyum Pasaj aşamasının küçük bir videosunuda çektim, you tube a eklemeye çalışıyorum