Hidrojen peroksit yöntemi tutmadı, biraz daha araştırma yaptım ve tekniğimi biraz daha geliştirdim. Aşağıdaki kanalın videoları çok faydalı oldu:
https://www.youtube.com/user/Livingw...?nohtml5=False
Öncelikle çalışacağım odanın yerlerini ve tüm yüzeylerini çamaşır suyuyla temizledim. Alet edevatımı, petri kaplarımı masaya getirip onları da izopropil alkolle sildim. Hepa filtreli hava temizleyici cihazımı çalıştırıp odayı bir saat süreyle terk ettim.
Daha sonra üzerime yeni yıkanmış kıyafetlerimi giydim, varsa saçlara bone geçirmekte fayda var. Odaya gelip ellerimi dezenfekte etmekle işe başladım. Bu aşamada hava temizleyiciyi kapatmak lazım, hava akımı yaratmamak için. İşi biraz daha ilerletenler bu iş için bir hepa filtreli "laminar flow hood" kurulumu yaparak veya direk filtre önünde transferleri gerçekleştiriyorlar. Bu sayede işlemleri yaparken sürekli temiz hava geliyor ve havadan kontaminasyon riski en aza indiriliyor.
Daha sonra transferi yapacağım doku kültürünü içeren kabı (foto aşağıda, tarihi 2 Nisan) alıp yanına yeni PDA içeren bir petri kabı çıkardım. Transferi yapacağım kültürü arkalı önlü güzelce inceledim, ufak 1-2 yerde bakteriyel kontaminasyondan şüphelendiğim için onlardan mümkün olduğunca uzak noktalardan ve misellerin ışınsal şekilde hızlı büyüdüğü bölgelerden birkaç tanesini gözüme kestirdim. Alkolle temizlenmiş ince uçlu bıçağımı mum ateşinde uzunca tuttum, transferi yapacağım temiz petriyi çok kısa açıp bıçağın iki tarafını da agarın kenarında söndürdüm. Böylece hem bıçağın sıcaklığı düşüyor hem de temiz agarla bıçağın yüzeyini kaplamış oluyorsunuz, yapışma yüzeyi oluyor.
Daha sonra hızlı bir şekilde dokuyu alacağım petride gözüme kestirdiğim noktaya gelip mümkün olduğunca az açarak küçük bir kare parça kesip bıçağın üzerine aldım. Hemen temiz petrinin göbeğine üst yüzeyi aşağı gelecek şekilde oturttum, petriyi kapatıp kenara kaldırdım. Bundan sonra işlem kendini tekrar ediyor. Önemli nokta her transfer sonrasında bıçağı alkolle silip üzerine yapışan agar ve miselleri temizlemek ve tekrar ateşte ısıtmak.
Petrileri üst kapakta yoğuşabilecek sudan korumak için baş aşağı muhafaza etmek tavsiye ediliyor. Ancak yeni transfer yaptığınız petrileri ters çevirmeyin, parça tam yapışmadıysa çevirdiğinizde kapağa düşüyor
