Bitki Doku Kültürü Denemeleri
 

Merhaba, galiba konuyu biraz erken açtım :o. Ama halihazırda foruma yazacak vaktim varken konuyu açmak istedim. Şu anda eksik malzemelerimi tamamlıyor ve çalışmaları gerçekleştireceğim yeri ayarlamaya çalışıyorum. Elimde olan malzemelerimin bir fotoğrafını bırakıyor ve sahneden kısa süreliğine ayrılıyorum. :D

https://www.hizliresim.com/7l3j74e

Dracaena Sanderiana Doku Kültürü Çalışması
 

Kısa süreliğine demiştim ama bayağı olmuş:D. Maalesef hâlâ kimyasallarımın saflaştırma çalışmalarını bitiremediğimden bitki besini ile hazırlanan besi ortamı kullanıyorum. Besi ortamı 10g şeker 7g Agar agar ve bitki besini içermekte. Bu besi ortamına Dracaena Sanderiana yani şans bambusu sürgünleri ektim. Kültürlerin bu gün birinci günü, şimdilik kontaminasyon yok.

Sürgünlerin dezenfeksiyonu: 10 dk. sabunlu suyun içinde çalkalandılar, ardından sistemik bir fungusitde 10 dk. banyo yaptılar, fungusitden çıktıkları gibi hemen %10 çamaşır suyunda 10 dk. çalkalandılar (elimde Nadcc olmadığı için çamaşır suyu kullandım Nadcc olsaydı 150 ml suya 1.25 g Nadcc tablet atıp o şekilde de sterilizasyon yapılabilirdi). Artık iyice yorulan eksplantlarımızı %10 alkolde 1.5 dk. çalkalıyoruz, artık eksplantlarımızı besi ortamımıza aktarabiliriz. Eğer elinizde varsa alkol yerine oksijenli su ile de dezenfeksiyon yapabilirsiniz. Sabunlu sudan fungusite geçerken çeşmenin altında explantları duruluyoruz, çamaşır suyundan alkol banyosuna geçerken de explantları steril su ile duruluyoruz.

Fotoğraf kültür kavanozunun buğulu olması nedeni ile net çıkmamış kusura bakmayın:o

Eklenti 728821

Orkide Yapraktan Üretim Denemesi
 

Çürüyen orkidemden kestiğim yaprağı kültüre aldım medyada kontaminasyon oluşmadı. Bir gelişme olursa yeniden fotoğraf eklerim durumları bu şekilde.

Eklenti 728852

Eklenti 728853

Eklenti 728854

Sayın almuud hızınıza hayran kalmamak elde değil ilk çalışmanızda şans bambusunda durumlar nedir kontaminasyon gözlemlendi mi?

Sn. tropikalist kontaminasyon oluşmamasına rağmen maalesef yapraklar gelişmediler beyazlaşıp öldüler nedeni kullandığım medyadan, medyada hormon kullanmamamdan kaynaklı olabilir. Diğer şüphelendiğim neden ise yaprakları yatay şekilde ekmem olmuş olabilir yaprakları dik bir şekilde medyaya ekseydim belki de başarılı sonuç alabilirim.

Sizin çalışmalarınız nasıl gidiyor?

Benim çalışmalarım daha başlayamadı maalesef size çok imrendim umarım başarılı olursunuz

Ancak Bence başarısız olmanızın nedeni besi ortamı değil de sterilizasyon esnasında çok etkilenmiş olabilir çünkü sterilizasyon sırasında dokular beyazlayıp ölüyor anladığım kadarıyla hobibotanik sayfasında orkide çoğaltmada örneği vardı. Bencw sterilizasyonu kaldıramadı. Yine de danıştığım bilirkişiye (Doku_kültürcü) sebebini söylemesi için soruyu yöneltmek istiyorum.

Bitki doku kültüründe hormon işin olmazsa olmazıdır. Hormonsuz ortam bitkinin son aşamada dikilip fizyolojisini normalleştirmek amacıyla kullanılır. Sürgün gelişimi için sitokinin ağırlıklı bir ortam kullanmanız gerekir.

Sn. Doku Kültürcü elimde bir tane cattleya orkidesi var. Sizin bu orkidelerin tohumdan üretimiyle ilgili bilginiz var ise bize aktara bilir misiniz?

Öncelikle çiçeği tozlaştırmanız gerekiyor. Eğer elinizdeki bitki sibling (kısaca sib) melez ise (Bitkinin etiketinde yazar) kendi çiçek tozuyla tozlaştırıp tohum almanızın hiç şansı yok.

Sn. Doku Kültürcü siz en son ne zaman tohum getirttiniz? İthalat izni olmadan getirtmek mümkün mü? Günümüzde hâlâ aktif şekilde (gerçek) orkide tohumu satan bildiğiniz bir yer var mı?

Değerli forum üyeleri, forumda gümrük memuru arkadaşımız ya da gümrük memuru tanıdığı olan arkadaşımız var ise yardımcı olabilir mi? Acaba Türk gümrüğünün durumu ne? Tohum ya da orkide için ne diyorlar? Gümrükten geçiriyorlar mı geçirmiyorlar mı?

Doktora tez çalışmam için Avustralya'dan Burleighpark Orchid Nursery'den 2000'li yılların başlarında steril mikro bitki boyutlarında orkide almıştım. Bunun için Tarım Orman ve Köy İşleri Bakanlığı ürün geliştirme Müdürlüğünden ithalat izni almıştım. Oldukça zahmetli bir süreçti. Orkide tohumu için durum farklı. Toz tohum sınıfında yer alıyorlar ve bir mektup zarfı içinde kapınıza teslim ediliyor. İzin almanıza gerek yok, ekmeden önce dezenfekte etmeniz gerekiyor.
https://www.speciesorchids.com/SeedList.html adresinden gerçek orkide tohumu alabiliyorsunuz. Sorunlardan biri, Avustralya Posta servisinin zarfı bir şekilde kaybetmesi. Bu kayıp olayı Covid19 ile başladı. Her sene posta sistemini denemek için bir paket herhangi bir orkide türünden sipariş veriyorum. Henüz elime geçen olmadı. Bu sorunu "takipli" posta hizmeti alarak aşabilirsiniz ama o da astarı yüzünden pahalı. Diğer sorun ise elinize geçen tohumların canlılığını kaybetmiş olması. Ya çok az çimleniyorlar ya da hiç çimlenme olmuyor.
Bunun dışında ABD'de faaliyet gösteren Orkide Tohum Bankası (OSP) projesi de kapandı. İnternette "Orkide Tohumu" diye satılan tohumların neredeyse tamamı dolandırma amaçlı satılıyor. Orkide tohumu 5-6 taneyle satılmaz, en az 500-1000 adet satılır (tohumlar ince çekilmiş kahve iriliğinde olurlar ve çimlendirmek için özel steril besin ortamına ekilmeleri gerekir). Tayland'da bulunan Kumpol Panyawechmanit Covid19 nedeniyle öldüğü için bu tohum satıcısından da tohum almak mümkün değil. Ailesi, bu işi devam ettirmedi. Instagram'da Türkiye'de orkide fidesi satan kişiler var. Şansınızı oradan deneyin... Size tavsiyem, orkideleri "Flask" olarak alın. Saksılı almanız durumunda virüsle enfekte bitki satabiliyorlar (kasıtlı değil). "Flask" çok daha kontrollü olan laboratuvar ortamından size gönderiliyor. Saksılı bitkiler ise insan temasının oldukça yoğun olduğu (bakım, gübreleme vs.vs.) sera ortamından gönderiliyor.

Benim gümrükte takılan sebze tohumlarını vermeyip geri yollamışlardı

Size tohum gönderen kişinin de beyanı önemli. Gönderen kişinin hediye "gift" beyanı yapsaydı muhtemelen tohumlar elinize geçerdi.

Yeniden Merhaba
 

Nedenini anlayamadığım bir şekilde foruma girişime engel gelmişti. Erişim engelimin açılması ile tekrar foruma döndüm vs. Durumumu kısaca özetlemem gerekirse,

Yaz geliyor orkidelerimin hiç biri çiçek açmadı dolayısı ile elimde hiç orkide tohumu yok bir şekilde temin etmeyi deneyeceğim. Doku kültürü medyalarını hazırlamak için gerekli kimyasalları topladım bir kaç hormon vitamin kaldı. Şu anlık steril kabin olarak mecburen (fiyatlar dolayısı ile) sadece cam akvaryum ile devam edeceğim.

Elimde bir adet ölmek üzere gibi görünen cattleya orkidesi var eğer yaza kadar canlı kalmayı başarır ise onu kültüre alabilirim.
Şu anlık bu kadar İyi forumlar dilerim :D

Sn. Doku_Kültürcü basit (yapraktan, daldan) yapacağım doku kültürü çalışmaları için başlangıçta sadece 'kinetin' hormonu yeterli olur mu?

Bitkisine göre değişir ama oksin - sitokinin kombinasyonu kullanılır genellikle. Sitokinin olarak kinetin (3-5mg/L), sitokinin olarak da naftalen asetik asit (0.2-1mg/l). Yeni sürgün oluşturmak için Sitokinin ağırlıklı bir karışım kullanmanız gerekir mesela 3mg/l Kinetin + 0,2mg/ Naftalen asetik asit (NAA). Naftalen asetik asit en kolay ve ucuz alabileceğiniz bir hormon. CANSA firmasının Racine sıvı çözeltisinde NAA bulunuyor. Buzdolabında sakladığınız sürece yıllarca kullanabilirsinz.

Racine ilacının internette stoğu tükenmiş olarak görünüyor bitki koruma ürünleri bayilerinde bulabilir miyim?

Ya piyasadan kaldırıldı ya da sezon bittiği için piyasada yok. İndol butirik asit kullanabilirsiniz. Zengarden sitesinde saf halde toz formda satılıyor. IBA'nın potasyum tuzu (Suda çözünen formu). Kullanırken bir adet hassas teraziye ihtiyacınız olacak.

https://www.zengardentr.com/urun/kok...k-suda-cozulen

Elimde İBA var ancak biraz eski (13-14 sene merc kimyanın ürünü) hafif nem almış ve ufak topaklaşmalar oluşmuş. Sıkıntı çıkarır mı? Naa için baktığımda sizin dediğiniz ilaçla bire bir aynı içeriğe sahip farklı firmaların ürettiği ilaçlar var. Onlardan temin edeceğim.
Firmaların ürettiği tarım ilacı olarak satılan bitki büyüme düzenleyiciler büyük nimet. Birçok hormon bu şekilde bulunabiliyor.

Buzdolabında saklamışsanız bir deneyin. En basitinden bir Afrika Menekşesi yaprağında deneyin. Hızlı köklenme sağlıyorsa sorun yoktur...

Buzdolabında değil de gayet tozlu bir depoda :D

Hiiiç uğraşmayın. Tazesini alın ve buzdolabında saklayın.

Hocam fiyatlar malum:(, bugün sipariş ettiğim 25g lık kinetin hormonu elime geçti. 25g hormonun bana toplam maliyeti 1950TL...

IBA potasyum tuzu 1gram n11.co'da 209TL. Potasyum tuzu, suda serbest şekilde çözünür. 100ml su içerisine 100mg ilave edip karıştırın (1000ppm hormona karşılık gelir). Köklendirmek istediğiniz bitkileri bu çözeltiye 1saniye daldırıp çıkartın. kenarda bir gazete kağıdının üzerinde 10-15 dakika bekletin. Sonra dikin. Doku kültüründe kullanacaksanız, bir litre ortam için 1-2mg kadar kullanmanız gerekiyor. Yine 100mg/l çözelti hazırlayın. Bu çözeltiden, eczaneden alacağınız 5ml'lik bir enjektör yardımıyla 1-2ml çekip ortama ilave edin. Hazırladığınız çözeltiyi buzdolabında saklayın. Tartım yapabilmeniz için bir adet hassas terazi almanız gerekiyor...

10 mg hassasiyetinde bir hassas teraziye sahibim. Dediğiniz gibi bu sitelerden temin edeceğim yardımınız için teşekkür ederim:D
Biraz kimya çalıştım, bendeki İBA suda çözünmeyen form yani buz dolabına ihtiyaç duymuyor. Suda çözünenler sıcakta bozuluyor.

Hepsi sıcakta bozulur. Doktora yaptığım bölümdeki hocalardan bir tanesi, kullandığı saf malzemeyi -79°C'ye inen, DNA örneklerinin saklandığı, derin dondurucuda saklardı...

Sn. Doku Kültürcü son mesajlarımdan birinde dediğim gibi 25g kadar saf kinetin satın aldım firmanın dediğine göre 18-25C ısıda depolanmalıymış. Buz dolabına koymalı mıyım yoksa firmanın dediği gibi mi olmalı?

Buzdolabında saklayın. Kullanırken de, buzdolabından çıkarıp 1-2 saat oda sıcaklığında tutun, şişe sıcaklığı ile oda sıcaklığı eşitlensin. Bunu şu amaçla yapıyoruz, buzdolabından çıktığı için hava neminin yoğuşabileceği bir yüzey meydana gelir. Şişe ve içeriği ısınınca böyle bir tehlike kalmıyor.